UNIVERSIDAD LATINA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE FARMACIA
LABORATORIO No. 1
OBSERVACIÓN DE BACTERIAS
Introducción
Son
técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de
los Mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende
de la carga de la célula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos
tipos:
·
Catiónicos. Son
sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células
y las tiñen. Ejemplos: azul de metileno,
cristal violeta, safranina.
·
Anicónicos. Con carga
negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las Células,
sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
Nigrosina.
·
Liposolubles. Se mezclan
con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
·
Simples. Utilizan
un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una
Composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se
comportan de Forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las
células (azul de metileno, Safranina) o no (nigrosina).
·
Diferenciales. Se basan
en el hecho de que distintos tipos de células tienen distintaComposición
química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo
que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su
capacidad deTinción. En este apartado están dos tinciones de importancia
taxonómica y médica: latinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de
Ziehl-Neelsen). Estas tincionesutilizan más de un colorante.
·
Selectivas. Se basan
en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición
química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej;
tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos
metacromáticos.
Pueden
utilizarse uno o más colorantes
a)
Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe
Microorganismos
procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están
muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más
intensamente con este colorante que el resto de la célula.
b)
Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no
penetra en el interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño
celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro
objetivos
- Realizar
una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras
naturales.
- Realizar
dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una
u otra.
- Observar
la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de
agrupaciones que existen.
- Practicar
con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite
de inmersión.
MATERIAL
|
|
BACTERIAS DEL YOGURT
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de
la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche
dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus
bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto,
observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño
del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se
tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.
Procedimiento
- Extension: Realizar el frotis
disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.
- Fijacion Fijar con metanol o Xilol para eliminar parte de la grasa.
- Teñir Apoyar
el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul
de metileno o con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5
minutos.
- Lavar con agua
destilada
- Secar. pasar el portaobjetos
varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir
que llegue a hervir, hasta que se seque.
- añadir
una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
- Observar primero con el
objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×
Contestar las siguientes preguntas:
1-El yogur es un
alimento más fácilmente digerible que la leche, ¿por qué?
·
Los cultivos de bacterias que contiene el yogurt
quiebran las cadenas de lactosa y las hacen mas fácil para digerir ; este
proceso del yogurt modifica las proteínas de la leche haciéndolas mas digerible
2- En casos de intolerancia a la
lactosa, ¿qué alimento será más fácilmente tolerado,
la leche o el yogur? ¿Por qué?
·
El yogurt porque es un derivador de la leche y se
elabora a travez de la fermentación bacteriana de la leche que transfoema los
azucares en acidos . Como contiene una poca cantidad de lactosa el yogurt a
diferencia de la leche y eso hace que sea mas tolerado para los consumidores
3-
¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la formación del yogur a
partir de la leche?
·
Lactobacillusbulgaris
como streptococcus thermophilus realizan la fermentación del acido laticos.
Estas bacterias hacen la transformación de los azucares en la leche en acido
láctico ; esto le da una acidez al yogurt
4)
¿Qué otros procesos conoces en que se
empleen bacterias para la elaboración de algún producto alimenticio?
Fermentacion del vinagre à bacterias del acido acético –Z oxidacin aerobicos
estrictos à etanol à acido acético
BACTERIAS DEL VINAGRE
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la
fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación.
La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido
acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter.
Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.
- Tomar
con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o
de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
- Extender
la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
- Dejar
secar y fijar con calor.
- Teñir
2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre
el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos
proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La
flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen
abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías:
espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
- Con
una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla
en una gota de agua sobre el portaobjetos.
- Dejar
secar y fijar con calor.
- Teñir
2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SUELO
- La
variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es
prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios
y algunas, incluso, desconocidas para los microbiólogos. Para recoger la
muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en
vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín.
Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo
habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera.
Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, así como la parte
que no se va a teñir.
- Contestar las siguientes preguntas
1
¿Cuáles son las distintas formas y asociaciones que pueden presentar las
bacterias? Explícalas y haz un dibujo esquemático de cada una de ellas.
2. Enumera 5 las diferencias
entre las bacterias y otros tipos de células
Las bacterias son microorganismos unicelulares.
Su tamaño por lo general es de unos pocos micrómetros de largo y pueden adoptar
diferentes formas según las cuales se las
clásfica. Debido a que las bacterias si tienen una célula se
las considera sin duda uno organismo vivo unicelular. Las bacterias tienen toda la estructura celular
necesaria para su crecimiento y reproducción.En general se reproducen de forma
asexuada, aunque existen casos en los que el material genético necesario para
la reproducción se transmite de una bacteria a otra.
A grandes rasgos podemos definir a los virus como organismos
acelulares (sin celulas), compuestos de ácido nucleico, que no tienen
metabolismo propio y para replicarse necesitan habitar en las células de otro
organismo vivo, las cuales se denominan células huésped.
Los virus son acelulares, es
decir que no tienen células, por lo que existen discusiones científicas sobre
si considerarlos o no como la forma de vida más simple conocida hasta el
momento, ya que siempre necesitan de una célula hospedadora para vivir y
reproducirse. Los virus no respiran, no se mueven ni crecen. Sin embargo sí se
reproducen y mutan y se pueden adaptar a nuevos huéspedes.
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