TINCIÓN DE LA CÁPSULA BACTERIANA

LABORATORIO # 3

TINCIÓN DE LA CÁPSULA BACTERIANA

 

OBJETIVO

 El alumno  aprenderá  diversas  técnicas  para la tinción de la cápsula bacteriana en distintos cultivos bacteriológicos.

MATERIAL

Cultivo de 24 horas de Klebsiella Rhinoscleromatis en Macconkey o citrato de simmons       (puede aislarse del excremento seco de palomas)

Cultivo de 24 horas de Staphylococcus aureus en manitol sal Agar  (msa)

Cepa  de 24 horas en Agar Saboraud Cryptococcus neoformans.

Tinta china ( recientemente filtrada)

Frasco con mordente de Knaysi

Frasco con rojo congo

Frasco con mordente de cápsula

INTRODUCCION

          La cápsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide. El tamaño de estas cápsulas está influenciado por el medio en el que crece la bacteria. En algunos casos el grosor de la cápsula es sólo una fracción del diámetro de la célula, en otros casos la cápsula es mucho mayor que la célula.  Las cápsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y además sirven de reservorio de alimento almacenado. Tienen Propiedad Antifagocitaria : Dificulta o impide la fagocitosis, lo cual potencia su virulencia ya que favorece la multiplicación y facilita la invasión. Brinda Protección frente a Fagos.: Dificulta la fijación de bacteriófagos e impide el pasaje su pasaje que puedan afectar a la bacteria  Las cápsulas de ciertas bacterias productoras de enfermedades aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. Si la bacteria pierde totalmente su cápsula, puede perder su virulencia y por lo tanto su capacidad de producir enfermedad  Algunos ejemplos de bacterias productoras de cápsulas son: neumococos, Klebsiella., aunque también puede estar presente en bacterias gram positivas y Gram. negativas

        Sin embargo las cápsulas tiene  diversas propiedades como: Induce la producción de anticuerpos protectores (esto es útil en la producción de algunas vacunas)  y Permite la diferenciación de tipos serológicos dentro de la misma especie ya sea por aglutinación con sueros

PROCEDIMIENTO

TINCION DE CÁPSULA

A) METODO DE DUGUID

1.- Poner con el asa una gota pequeña de tinta china en el centro de un portaobjetos limpio.

2.-Poner una gota de agua del mismo tamaño junto a la gota de tinta china

3.- Tomar con el Asa bacteriológica un pequeño fragmento del cultivo de bacterias

4.- Hacer una suspensión ( sin extenderla) en la gota de agua

5.- Mezclarla con la tinta china

6.- Colocar un cubreobjetos sobre la suspensión, evitando que queden burbujas

7.- Observar la preparación al microscopio con el objetivo seco fuerte y de inmersión.

La cápsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria en un campo oscuro.

B) METODO DEL ROJO CONGO

1.- Poner una gota pequeña de rojo congo en el centro de un portaobjetos limpio

2.-Tomar con el asa bacteriológica un pequeño fragmento de crecimiento de colonia bacteriana

3.- Suspender la muestra en la gota de rojo congo y hacer un frotis

4.- cubrir el frotis ( SIN FIJARLO A LA FLAMA DEL MECHERO) con una gotas del mordente

     de cápsula y dejarlo actuar durante un minuto.

5.-Lavar el frotis con agua destilada y dejarlo secar al aire

6.- Observar la preparación al microscopio con el objetivo de inmersión

La cápsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria de color rojo en un campo de azul oscuro.

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué importancia médica tiene la cápsula bacteriana?

La importancia medica que tiene la capsula bacteriana es que mediante ellase pueden ver las diferentes bacterias cuales nos pueden afectar con enfermedades e infecciones, como tambien pueden descubrir bacterias que nos ayuden a nuestra salud

2.-¿Qué características presenta la cápsula en las bacterias?

La cápsula es una capa rígida organizada en matriz impermeable que excluye colorantes como la tinta china. En cambio, la capa de material extracelular que se deforma con facilidad, es incapaz de excluir partículas y no tiene un límite definido, se denomina capa mucosa o glucocalix. Ambas se pueden detectar con métodos como la tinción negativa o la tinción de Burri.

La cápsula le sirve a las bacterias de cubierta protectora resistiendo la fagocitosis. También se utiliza como depósito de alimentos y como lugar de eliminación de sustancias de desecho. Protege de la desecación, ya que contiene una gran cantidad de agua disponible en condiciones adversas. Además, evita el ataque de los bacteriófagos y permite la adhesión de la bacteria a las células animales del hospedador.

3.- ¿Qué importancia tiene  la presencia de la cápsula  en las bacterias?

La cápsula bacteriana es la capa con borde definido formada por una serie de polímeros orgánicos que en las bacterias se deposita en el exterior de su pared celular. Generalmente contiene glicoproteínas y un gran número depolisacáridos diferentes, incluyendo polialcoholes y aminoazúcares.

4.- ¿Qué sucede con las bacterias cuando estas llegan a perder la cápsula?
Al perder la capsula la bacteria sigue presentando sus características patógenas pero pierden virulencia.Las bacterias al estar capsulada dificultan la fagocitosis además poseen un anfígeno llamadoanfígeno k, ya que la capsula les confiere antigeneidad o especificidad antigénica; por lo que a mayor tamaño de la capsula la bacteria posee mayor virulencia.

5.- Investiga de qué está compuesta  la capa de material mucosa que forma la cápsula

La capa mucilaginosa usualmente compuesta de glicoproteínas y proteoglicanos que está presente sobre la superficie exterior de los peces también se considera un glicocálix. El término fue aplicado inicialmente a la matriz de polisacárido secretada por las células epiteliales y que forman una capa superficial. Los glicocálix son compuestos, casi siempre con cadenas de carbohidratos, que recubren la superficie celular.