laboratorio # 7

SEMBRADO EN PLACA DE microorganismos del medio ambiente

 

Objetivos

 

-         Observar la gran variedad de microrganismos presentes en el medio ambiente, determinando las diferentes morfologías de colonias que se obtienen.

-         Los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un medio de cultivo en cajas de Petri.

MATERIAL

• 3 cajas de Petri estériles preparadas con Agar nutritivo
• Caja de hisopos estériles sin abrir toallas de papel
• 3 cajas de petri estériles preparadas  con Agar sangre.
• Cinta pegante
• Marcador permanente o lápiz de cera
• Un desinfectante con 70% de solución de alcohol, 10% de una solución blanqueadora, jabón líquido Extran o alkox , septisol.

INTRODUCCIÓN

La población microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja. Cientos de especies microbianas habitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto intestinal y la piel. Al nacer, los microbios inmediatamente empiezan a colonizar nuestros cuerpos, así como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor hasta que entran en contacto con una superficie que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran más frecuentemente en la oscuridad, en objetos húmedos que a menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la vegetación. Las superficies del baño, los cepillos para el cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las tablas de cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las paredes tienen menos porque son pobres en nutrientes y secos.

Un estudio adecuado de microorganismos que hay en estos hábitat requiere técnicas que permitan conocer y ordenar la compleja población mixta o cultivo mixto, separándole en sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivo puro consta de una población de células derivadas todas ellas de una célula parental. Los microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales nutritivos denominados medios. Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase que se debe de utilizar depende de muchos factores, uno de los cuales es la clase de microorganismos que se va a cultivar. El material que se inocula sobre el medio se denomina inóculo mediante alguna técnica (siembra por estría en placa o siembra en masa en placa). Durante la incubación a 37:C , las células microbianas individuales se reproducen tan rápidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen masas visibles de células denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada colonia  diferente es presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de microorganismo. Si dos células microbianas procedentes del inóculo original quedan muy cerca una de otra sobre el medio de Agar, la masa de células observables no será un cultivo puro. La mayoría de los microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero algunos son patógenos o causan enfermedad. Por esta razón, queremos controlar el número de microbios que nos rodea. La posibilidad de infectarnos aumenta con el número de microbios en los objetos circundantes. Pero ¿qué podemos hacer para reducir el número de microbios en las superficies que nos rodean?

PROCEDIMIENTO

En esta actividad escogerás un fomite (cualquier objeto inanimado que pueda causar enfermedad en los organismos por contener microorganismos como: la manija, el marco, el control remoto de la televisión, una moneda). Este fomite ayudará a confirmar la presencia de microbios y los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un medio de cultivo en cajas de Petri.

1. Si tienes el cabello largo, recógetelo para mantenerlo lejos de las cajas de Petri cuando estés trabajando. Lava tus manos. Limpia tú área de trabajo frotando suavemente, con la solución desinfectante en una toalla de papel. Saca tus cajas de Petri pero no abras las cajas hasta que se te indique.

2. Escoge un objeto del salón de laboratorio (la manija, el marco, el control remoto de la televisión, una moneda, etc.). Toma una caja de Petri sin abrir y con tú lápiz de cera o marcador, divide la base de la caja en cuatro secciones iguales. Escribe el nombre del objeto al otro lado y designa las secciones de 1 hasta 4. Abre la caja de hisopos de algodón y escoge uno con cuidado para no tocar la punta. Limpia tú objeto escogido con todos los lados de la punta del hisopo volteándolo y retorciendo el hisopo a medida que lo mueves por la superficie del objeto.

3. Ahora abre la tapa de la caja y suavemente haz cuatro siembras sobre la superficie de la caja como se muestra en la ilustración, empezando en la sección designada "1" y continuando en el orden de las secciones, de manera que la última siembra esté en la sección 4. Presiona firme pero suavemente y no retiñas las siembras anteriores. Tus siembras sólo deben dejar una impresión muy ligera en el Agar. Cierra la caja y séllala con dos pedazos de cinta. No cubras la caja con cinta o no podrás verla bien.

4. Divide una segunda caja de Petri en 4 secciones numeradas de 1 hasta 4 y desígnala “Control.” Limpia la mitad del objeto que escogiste anteriormente con una toalla de papel humedecida con agua-solo frótala un par de veces; no la restriegues. Con un nuevo hisopo estéril, toma muestra del área limpiada. Abre la tapa de la segunda caja y haz SUAVEMENTE 4 siembras en la superficie de la caja, siguiendo el orden de las secciones numeradas como lo hiciste previamente. Cierra la caja y séllala.

5. Divide la tercera caja de Petri en 4 secciones numeradas y desígnalas con el nombre del desinfectante que escogiste (por ejemplo "blanqueador"). Usa el desinfectante escogido para limpiar la otra mitad del objeto que trabajaste antes. Con un nuevo hisopo estéril, toma muestra del área. Repite el proceso de sembrar la caja. Ciérrala y séllala.

6. Esteriliza los hisopos usados con desinfectante y descártalos. Pon las cajas en un lugar apartado y déjalas incubar a la temperatura de 37·C durante 24 a 48 horas. Limpia tu área de trabajo con la solución desinfectante y lava tus manos.

7.- Repite todo el experimento utilizando Cajas de cultivo con Agar sangre sólo que ahora selecciona otro Fomite que no hayas empleado

7. Después de que hayan pasado dos días, mira las cajas de Petri iniciales. No la abras. A la vez examina las otras cajas de Petri sin abrirlas. Crea una tabla que compare las cajas sembradas antes y después de limpiar el objeto (mira la tabla de ejemplo). Asegúrate de indicar si los microbios crecieron en cada siembra.

8. Nota: Cuidadosamente abre las cajas de Petri en un lavaplatos e inúndalas con blanqueador o alcohol sin diluir. Déjalas por una hora y enjuágalas completamente; colócalas en una bolsa plástica, amárrala y descártala. Asegúrate de no tocar la superficie de las cajas cuando las abras y lava tus manos cuidadosamente después de manipularlas. Limpia tú área de trabajo con la solución desinfectante.

 

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué es un cultivo puro de microorganismos?

Se denomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un tipo de

microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de

manera que todos los de el mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad.

2.- Qué es un inóculo?

 

Es algo que implantaremos  en este caso un microorganismo o material infeccioso  que crecerán o se reproducirán, en este medio de cultivo como es la placa Petri.

3.-  Físicamente en un medio de cultivo de microorganismos cuando se dice que no forma un cultivo puro?

 

Un cultivo no se considera puro cuando se encuentran dos o más Microorganismo

en un cultivo o cuando no se selecciona un inoculo específico para el__________ experimento.

 

4.- Qué tipo de técnica empleaste para la siembra de microorganismos?

 

Empleamos algunos métodos como

*siembra por estría en caja.           *siembra en masa en caja.

 

 

5.- ¿Cómo podemos controlar la contaminación microbiana?

Para controlar la contaminación microbiana podemos tomar en cuenta trabajar en un área aislada, no contaminar más objetos, limpiar con blanqueador o alcohol las cajas utilizadas ante de deshacernos de ellas  desinfectantes el área donde trabajamos y lavar nuestras manos.

6.- Completa en la siguiente  tabla  anotando X en los espacios correspondientes a las divisiones realizadas en donde hayan crecido los microorganismos

A)  MEDIOS DE CULTIVO CON AGAR NUTRITIVO

	Caja 1				Caja 2				Caja 3
Siembra	1	2	3	4	1	2	3	4	1	2	3	4
Crecimiento	X				X				X

B)MEDIOS DE CULTIVO CON AGAR SANGRE

	Caja 1				Caja 2				Caja 3
Siembra	1	2	3	4	1	2	3	4	1	2	3	4
Crecimiento	X				X				X

 

 

OBSERVACIONES:   Dibuja todos los pasos empleados en el sembrado de las cajas de Petri con Agar nutritivo. Y los resultados de las colonias bacterianas que crecieron.

 

 

CONCLUSIONES

 En este experimento pudimos comprobar por medio de la práctica y observación que en nuestro medio ambiente se encuentran diferentes microorganismos las cuales para nosotros pueden ser inofensivos pero en algún momento pueden llegar a ser patógenos.