UNIVERSIDAD LATINA

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE FARMACIA

LABORATORIO No. 1

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS

Introducción

Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los Mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante.

Los colorantes pueden ser de distintos tipos:

·         Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y  las tiñen. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.

·         Anicónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las Células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina, Nigrosina.

·         Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.

Las tinciones pueden ser:

·         Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una Composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de Forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, Safranina) o no (nigrosina).

·         Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distintaComposición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad deTinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: latinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tincionesutilizan más de un colorante.

·         Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos.

Pueden utilizarse uno o más colorantes

a)    Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe

Microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.

b)    Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro

objetivos

1. Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
3. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
4. Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.

MATERIAL

Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.

Colorantes para tinción: a) Solución de nigrosina o eoisna 1% b) Solución de safranina al 0,5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersión

BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

Procedimiento

1. Extension: Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.
2. Fijacion Fijar  con metanol o Xilol  para eliminar parte de la grasa.
3. Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul de metileno o con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5 minutos.
4. Lavar con agua destilada
5. Secar. pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
6. añadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
7. Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×

Contestar las siguientes preguntas:

1-El yogur es un alimento más fácilmente digerible que la leche, ¿por qué?

·         Los cultivos de bacterias que contiene el yogurt quiebran las cadenas de lactosa y las hacen mas fácil para digerir ; este proceso del yogurt modifica las proteínas de la leche haciéndolas mas digerible

            2- En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué alimento será más fácilmente tolerado,

            la leche o el yogur? ¿Por qué?

·         El yogurt porque es un derivador de la leche y se elabora a travez de la fermentación bacteriana de la leche que transfoema los azucares en acidos . Como contiene una poca cantidad de lactosa el yogurt a diferencia de la leche y eso hace que sea mas tolerado para los consumidores

3- ¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la formación del yogur a partir de la leche?

·         Lactobacillusbulgaris como streptococcus thermophilus realizan la fermentación del acido laticos. Estas bacterias hacen la transformación de los azucares en la leche en acido láctico ; esto le da una acidez al yogurt

4) ¿Qué otros procesos conoces en  que se empleen bacterias para la elaboración de algún producto alimenticio?

Fermentacion del vinagre à bacterias del acido acético –Z oxidacin aerobicos estrictos à etanol à acido acético

BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.

1. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
3. Dejar secar y fijar con calor.
4. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.

BACTERIAS DEL SARRO DENTAL

El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

1. Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.

BACTERIAS DEL SUELO

1. La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbiólogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín. Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, así como la parte que no se va a teñir.
2. Contestar las siguientes preguntas

1 ¿Cuáles son las distintas formas y asociaciones que pueden presentar las bacterias? Explícalas y haz un dibujo esquemático de cada una de ellas.

2. Enumera 5 las diferencias entre las bacterias y otros tipos de células

Las bacterias son microorganismos unicelulares. Su tamaño por lo general es de unos pocos micrómetros de largo y pueden adoptar diferentes formas según las cuales se las clásfica. Debido a que las bacterias si tienen una célula se las considera sin duda uno organismo vivo unicelular. Las bacterias tienen toda la estructura celular necesaria para su crecimiento y reproducción.En general se reproducen de forma asexuada, aunque existen casos en los que el material genético necesario para la reproducción se transmite de una bacteria a otra.

A grandes rasgos podemos definir a los virus como organismos acelulares (sin celulas), compuestos de ácido nucleico, que no tienen metabolismo propio y para replicarse necesitan habitar en las células de otro organismo vivo, las cuales se denominan células huésped.

Los virus son acelulares, es decir que no tienen células, por lo que existen discusiones científicas sobre si considerarlos o no como la forma de vida más simple conocida hasta el momento, ya que siempre necesitan de una célula hospedadora para vivir y reproducirse. Los virus no respiran, no se mueven ni crecen. Sin embargo sí se reproducen y mutan y se pueden adaptar a nuevos huéspedes.

Su tamaño es realmente muy pequeño, generalmente se encuentra entre los 20 a 300 nm. (milmillonésima parte de un metro). Una de las enfermedades más graves e importantes causada por un virus es el HIV (virus de inmunodeficiencia adquirida).